pbs洗滌細胞如何操作

操作步驟去下

步驟一：取材

撕取洋蔥鱗莖內表皮2～3mm2置於載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩衝液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。（撕取的材料大小適中，且為內表皮）

步驟二：去垢處理

用吸水紙吸淨浸泡材料的PBS緩衝液，加2～3滴37°C預溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，並立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。（吸水紙不要直接在材料上面吸，以免帶丟材料，去垢處理過程中不要讓材料乾燥）

步驟三：沖洗

吸去 1%Triton，用6mmol的PBS緩衝液輕輕沖洗，反覆兩至三次。

步驟四：固定

用吸水紙吸盡PBS緩衝液，加2滴3%戊二醛固定約20分鐘。

步驟五：沖洗

吸去3%戊二醛固定液，用6mmol的PBS緩衝液輕輕沖洗，反覆兩至三次。

步驟六：染色

吸去PBS緩衝液，滴幾滴0.2%考馬斯亮藍R250染料，染色約10分鐘。

步驟七：製片

加蓋蓋玻片，用吸水紙吸去多餘染料。（加蓋玻片時傾斜放置，避免氣泡產生吸去多餘染料時僅吸去蓋玻片四周溢位的染料，不要太乾，以免產生氣泡）

步驟八：觀察

觀察將制好的玻片置於低倍鏡下，可見到規則排列的多邊形洋蔥表皮細胞輪廓，在細胞質中可見到被染成藍色的粗細不等的分枝狀或點狀結構，這就是細胞骨架。然後轉高倍鏡繼續觀察，調節細準焦螺旋可見到細胞骨架的立體結構。

取出細胞皿將培養基倒出，然後加入1ml的pps。後放入搖床。一分鐘後將pbs倒出，然後再加入新的pbs，連續重複三次即可。