石蠟去染色的方法
1、首先取下組織,投入預先配好的固定液福爾馬林中,使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死後的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。
2、固定成功後,修剪,用水洗去多餘固定液,然後放入不同濃度的酒精脫水,一般用由低濃度到高濃度酒精依次浸泡,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置於既溶於酒精,又溶於石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精。
3、將已經已經融化好的石蠟倒入脫水透明後的組織中,放入溶蠟箱中保溫一段時間,待石蠟液完全滲入組織塊中,在用石蠟液包埋(石蠟液的體積最好大於組織體積的10倍),冷卻凝固成塊,以便實驗中切片。
4、切片、展片、烤片:將包埋好的蠟塊固定於切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺摺,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恆溫箱中烘乾。
5、染色:脫蠟——水化——染色——脫水——透明——封片——觀察
使用二甲苯脫蠟,然後再使用從低到高濃度的酒精進行水化,以便染料可以進入組織。
使用蘇木精染料進行染色,流水稍洗去染料,再用0.1%鹽酸乙醇進行分化,然後水洗去多餘染料。
伊紅液染色,,染色完成後用流水洗去多餘染料。
水洗完染料後用從低到高濃度的酒精進行醇洗以及脫水。
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