羊皮中的膠原蛋白肽怎麼提煉
1、一種具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽,其特徵在於:所述羊皮膠原蛋白肽的氨基酸序列為gly-pro-ala-gly-pro-ile-gly-pro-val。
2、根據權利要求1所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:包括如下步驟:
羊皮的前處理:將脫毛羊皮物理脫脂後洗淨、剪成1×1cm的羊皮粒,然後進行脫灰、脫脂及除雜蛋白處理,處理完畢後對羊皮粒進行再次清洗
羊皮膠原蛋白的提取:將經過前處理所得羊皮粒採用鹼溶液浸泡,浸泡後收集羊皮粒進行脫鈣、雙氧水處理,羊皮粒清水沖洗後進行熱解處理,所得溶液即為羊皮膠原蛋白溶液
膠原蛋白的酶水解:得到的羊皮膠原蛋白溶液的ph,加入alcalase鹼性蛋白酶、中性蛋白酶和風味蛋白酶進行水解,水解完畢後高溫滅酶,收集上清液備用
膠原蛋白肽的製備:將酶解處理後的羊皮膠原蛋白肽上清液澄清處理,對酶解液進行dpp-iv抑制活性檢測,濃縮溶液後冷凍乾燥,即為具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽。
3、根據權利要求2所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述羊皮的前處理中包括如下步驟:
原料羊皮浸水清洗:將脫毛羊皮用清水沖洗至皮料水中無砂土,浸泡並在浸泡的過程中保持換水,剪除多餘脂肪,然後在攪拌的條件下清洗,並在清洗的過程中保持換水
浸泡脫灰:將清洗後的羊皮加入硫酸銨溶液,常溫下攪拌浸泡並保持換溶液。脫灰後使用去離子水沖洗並調節ph至7.5
除雜蛋白:將脫灰後的羊皮加入到食鹽水中,常溫下攪拌浸泡並更換一次溶液,浸泡後用水洗滌乾淨
二次脫灰:浸泡後用水洗滌乾淨的羊皮粒皮塊中加入到純鹼溶液中浸泡並攪動,最後瀝水、水洗3次
脫脂:將洗淨的羊皮粒與乙醇混合,浸泡脫脂後過濾除去乙醇,用蒸餾水清洗羊皮粒後,再將羊皮粒加入到nacl溶液中,浸泡24h後過濾,所得羊皮粒用蒸餾水清洗後備用。
4、根據權利要求2所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述羊皮膠原蛋白的提取中包括如下步驟:
鹼液浸泡:取脫脂後的羊皮粒加入到氫氧化鈉溶液室溫浸泡,每天攪拌3次,每天換一次相同濃度和體積的鹼液。
脫鈣處理:使用硫酸鈉溶液浸泡鹼處理後羊皮粒,室溫放置24h。室溫下、去離子水沖洗羊皮粒至溶液ph為7.5
雙氧水處理:脫鈣後的羊皮粒浸入雙氧水溶液中,浸泡24h。隔一段時間後更換雙氧水溶液。隨後,羊皮粒用水清洗乾淨。
熱解處理:清洗乾淨後的羊皮粒浸入水中,進行煮膠,升高溫度保持一段時間。
5、根據權利要求2所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述膠原蛋白的酶水解中包括如下步驟:
調節ph和溫度至後續加入的蛋白酶的最適ph和溫度,加入蛋白酶,酶解足夠時間。將酶解後得到的酶解液升溫進行滅酶。
6、根據權利要求2所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述膠原蛋白肽的製備中包括如下步驟:
澄清過濾:以矽藻土或活性炭為吸附劑,使用砂芯漏斗(三層定量濾紙)抽濾,濾液使用離心機在高轉速下離心,去上層油脂和下層沉澱,得澄清溶液
濃縮乾燥:將澄清後溶液旋轉蒸發,體積濃縮一半以上濃縮液經冷凍乾燥後得膠原蛋白肽。
7、根據權利要求5所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述酶水解中蛋白酶為alcalase鹼性蛋白酶、中性蛋白酶和風味蛋白酶。
8、根據權利要求5所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述酶水解中蛋白酶的用量為7200~16000u。
9、根據權利要求5、7、8中任一所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述酶水解中蛋白酶為alcalase鹼性蛋白酶,所述蛋白酶的用量為9600u。
10、根據權利要求4所述的具有dpp-iv抑制活性的羊皮膠原蛋白肽的製備方法,其特徵在於:所述鹼液浸泡中鹼的濃度為0.5mol/l。
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