檢測培養基是否被汙染的方法有

常用的檢測方法有培養法、熒光染色法、PCR法和電鏡觀察法。

培養法是最為可靠且成本低廉的方法，但培養週期較長，常用於細胞以及臨床治療細胞的支原體檢査

熒光染色法是用特異熒光染料(Hoechst 33258)染色後在熒光顯微鏡下進行檢測，熒光染料(Hoechst 33258)是一種能和DNA特異結合物質，如果檢測樣品為支原體汙染，則附在細胞表面和分散在細胞與細胞之間的支原體DNA著色，在熒光顯微鏡下可見

PCR法檢測是通過對支原體特定的序列設計引物，當存在支原體汙染時通過PCR特異性擴增，會將目標DNA特異性的複製，然後通過瓊脂糖電泳觀檢測，會跑出條帶出現陽性結果，反之當沒有支原體汙染時，由於沒有模板，PCR無法擴增，則瓊脂糖電泳跑不出條帶，出現陰性結果電鏡觀察法是利用電子顯微鏡的超級放大功能，直接觀察培養細胞中支原體汙染情況。

在此主要介紹利用熒光染色法來檢測培養細胞中的支原體，具體檢測步驟如下:

(1)細胞爬片培養:待測細胞培養至傳代水平，將細胞消化後接種至含有玻片的細胞板中，培養至60%-70%匯合時，進行檢測

(2)漂洗:將細胞板中的培養液吸出，取出玻片，用PBS輕輕漂洗

(3)固定:加入適量的固定液，室溫放置10min

(4)漂洗:用PBS輕輕漂洗3次

(5)染色:加入適量的熒光染料(Hoechst 33258)工作液，在室溫下放置10min

(6)漂洗:用PBS輕輕漂洗3次

(7)鏡下觀察:將玻片晾乾後，滴加抗熒光猝滅劑，於熒光顯微鏡下觀察、拍照

檢測步驟如下：

1、固體培養基可以37攝氏度培養24h觀察有無雜菌生長

2、液體培養基可以無菌操作取0.1ML塗布到無菌蛋白棟牛肉膏培養基上37攝氏度培養24h觀察有無雜菌生長.

3、觀察菌落的形貌一般可以看出上述固體或液體培養基是否汙染。

4、仍然分辨不出 ，需要進行鏡檢觀察。

5、鏡檢觀察到有活體微生物表明汙染。

檢測培養基是否被汙染，常用的方法是把空白的培養基，也就是未接種各種菌類的培養基。於接種後的培養基放在相同的條件下培養一段時間，觀察是否有菌落的出現。如果出現菌落，那就說明這個培養基被汙染了。