為什麼進行質粒的酶切

雙酶切就是為了驗證是否有目的基因，如果雙酶切條帶正確，而且PCR也沒有問題，就可以確定質粒構建成功。

質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA片段(<10kb)且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。

在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA片段， 然後體外使兩者相連線， 再用所得到重組質粒轉化細菌，即可完成。但在實際工作中， 如何區分插入有外源DNA的重組質粒和無插入而自身環化的載體分子是較為困難的。

通過調整連線反應中外源DNA片段和載體DNA的濃度比例，可以將載體的自身環化限制在一定程度之下，也可以進一步採取一些特殊的克隆策略，如載體去磷酸化等來最大限度的降低載體的自身環化，還可以利用遺傳學手段如α互補現象等來鑑別重組子和非重組子。