牛奶封閉液配製方法

1、封閉液的選用要求

1）常用封閉液為脫脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、無蛋白封閉液等

2) 封閉液濃度：封閉時一般用5%脫脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%無蛋白封閉液配製二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶，全部用PBS稀釋

3) 封閉時間：室溫1-2h、4度過夜或37度半小時

4) 封閉液pH：一般5%脫脂牛奶pH大約為6.0-6.5左右，而1%脫脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的WB-Protocol中要求封閉液和稀釋抗體的封閉液需要調pH至7.4但是大多數抗體不調pH也可以做出來

5) 個人經驗：5%脫脂牛奶封閉效果最佳，但有時也可能封閉過度，可以與BSA或無蛋白封閉液輪流更換

推薦用TBST進行稀釋獲得5%的牛奶封閉液（5g/100mL）。

很多人的經驗是：脫脂牛奶封閉後背景比較乾淨，而檢測磷酸化蛋白則用BSA（因脫脂牛奶含有較多的磷酸化蛋白，會干擾的）